- 中文名
- 載體
- 外文名
- Vector
- 常見種類
- 細(xì)菌質(zhì)粒、噬菌體和動(dòng)植物病毒
- 本 質(zhì)
- DNA分子
- 載體分類
- 病毒載體,質(zhì)粒載體,噬菌體載體
目錄
- 1 必備條件
- 2 載體分類
- 3 實(shí)際運(yùn)用
載體必備條件
編輯①在宿主細(xì)胞中能保存下來并能大量復(fù)制,且對受體細(xì)胞無害,不影響受體細(xì)胞正常的生命活動(dòng)。
②有多個(gè)限制酶(restriction enzymes)切點(diǎn),而且每種酶的切點(diǎn)最好只有一個(gè),如大腸桿菌pBR322就有多種限制酶的單一識別位點(diǎn),可適于多種限制酶切割的DNA插入。
③含有復(fù)制起始位點(diǎn),能夠獨(dú)立復(fù)制;通過復(fù)制進(jìn)行基因擴(kuò)增,否則可能會使重組DNA丟失。
④有一定的標(biāo)記基因,便于進(jìn)行篩選。如大腸桿菌的pBR322質(zhì)粒攜帶氨芐青霉素抗性基因和四環(huán)素抗性基因,就可以作為篩選的標(biāo)記基因。一般來說,天然運(yùn)載體往往不能滿足上述要求,因此需要根據(jù)不同的目的和需要,對運(yùn)載體進(jìn)行人工改建?,F(xiàn)在所使用的質(zhì)粒載體幾乎都是經(jīng)過改建的。
⑤載體DNA分子大小應(yīng)合適,以便操作。
載體載體分類
編輯質(zhì)粒載體
質(zhì)粒載體是一種相對分子質(zhì)量較小、獨(dú)立于染色體DNA之外的環(huán)狀DNA(一般有1~200 kb左右,kb為千堿基對),有的一個(gè)細(xì)菌中有一個(gè),有的一個(gè)細(xì)菌中有多個(gè)。質(zhì)粒能通過細(xì)菌間的接合由一個(gè)細(xì)菌向另一個(gè)細(xì)菌轉(zhuǎn)移,可以獨(dú)立復(fù)制,也可整合到細(xì)菌染色體DNA中,隨著染色體DNA的復(fù)制而復(fù)制。
噬菌體載體
利用噬菌體作載體,主要是將外來目的DNA替代或插入中段序列,使其隨左右臂一起包裝成噬菌體,去感染大腸桿菌,并隨噬菌體的溶菌繁殖而繁殖。
病毒載體
質(zhì)粒和噬菌體載體只能在細(xì)菌中繁殖,不能滿足真核DNA重組需要。感染動(dòng)物的病毒可改造用作動(dòng)物細(xì)胞的載體。由于動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)和操作較復(fù)雜、花費(fèi)也較多,因而病毒載體構(gòu)建時(shí)一般都把細(xì)菌質(zhì)粒復(fù)制起始序列放置其中。使載體及其攜帶的外來序列能方便地在細(xì)菌中繁殖和克隆,然后再引入真核細(xì)胞。
載體實(shí)際運(yùn)用
編輯在實(shí)際生活中,胰島素就可以通過使用載體將已插入胰島素基因片段的質(zhì)粒放入大腸桿菌內(nèi)。經(jīng)過插入基因片段的質(zhì)粒就稱作載體。該質(zhì)粒在細(xì)菌內(nèi)可以進(jìn)行自我復(fù)制,并且不會影響到生物原來的活動(dòng)。
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